Técnicas Inmunohistoquímicas: características generales y aplicaciones

5 al 14 de Junio de 2018 de 15 a 19 hs.
Facultad de Ciencias Veterinarias.
Universidad Nacional de Rosario.

Objetivos:

  • Conocer el fundamento de las técnicas inmunohistoquímicas (IHQ) y su aplicación.
  • Adquirir los conocimientos necesarios para la adecuada recolección y procesado de muestras, que permitan la obtención de resultados satisfactorios.
  • Adquirir entrenamiento en el desarrollo completo de las principales técnicas IHQ.
  • Realizar una correcta lectura e interpretación de resultados
  • Adquirir criterios que le permitan seleccionar la técnica IHQ que mejor se adapte a sus requerimientos.

Población objetivo
Graduados universitarios de instituciones públicas o privadas, nacionales o extranjeras, que posean título de carreras afines a las Ciencias Biológicas y Técnicos Histotecnólogos.

Cronograma

  • Martes, 5 de Junio de 2018 Teoría (Unidades I a IV)
  • Miércoles, 6 de Junio de 2018 Teoría (Unidades V y VI) / Prácticas
  • Jueves, 7de Junio de 2018 Teoría (Unidades VII y VIII) / Prácticas
  • Martes, 12 de Junio de 2018 Prácticas
  • Miércoles, 13 de Junio de 2018 Prácticas
  • Jueves, 14 de Junio de 2018Resultados/obtención de imágenes Discusión casos

Director
Dr. Fabricio Vigliano.
Cátedra de Histología I y Embriología Básica.
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de Rosario (FCV-UNR).

Comité organizador
Dra. Andrea Boaglio
M.V. Manuel Campana
Dr. Pablo Cerutti
M.V. Mariano Garate
Tec. Sup. Hist. María Belén Mascambroni
Lic. Andrea Mendia
M.V. Lautaro Muñoz
M.V. Alejandra Prado
Dr. Agustín Rinaudo
Sr. Sacha Santía
M.V. Caren Savia
M.V. Marcelo Tobin
Dr. Fabricio Vigliano

Disertantes

  • Dr. Pablo A. Cerutti.
    Profesor Adjunto dedicación exclusiva.
    Cátedra de Histología II y Embriología Especial.
  • Téc. Sup. en Histotecnología María Belén Mascambroni.
    Auxiliar de Primera dedicación semiexclusiva.
    Cátedras de Histología I y Embriología Básica e Histología II y Embriología Especial.

Programa del curso:

I. INTRODUCCION A LAS TECNICAS INMUNOHISTOQUIMICAS.
El objetivo de la histoquímica. La histoquímica en el laboratorio. Enzimo-Histoquímica. Principios. Inmunohistoquímica.

II. MUESTREO Y FIJACION.
Obtención de la muestra: importancia, tipos, tamaño. Bases teóricas de la fijación. Formación de enlaces cruzados. Distintos tipos fijadores. Ventajas y desventajas de cada uno. Congelación. Muestreo y fijación para microscopía electrónica de transmisión (MET).

III. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS.
Inclusión en parafina: deshidratación, aclarado, infiltración. Inclusión definitiva y formación del bloque. Realización de cortes histológicos. Secado y almacenamiento. Coloración y montaje. Citologías. Cortes en congelación y MET.

IV. RECUPERACIÓN ANTIGENICA.
Fundamentos. 1- Métodos físicos: tipos, procedimiento, ventajas y desventajas. Tampones de recuperación. 2- Método enzimático: tipos, procedimiento, ventajas y desventajas. Recuperación antigénica y su uso en los inmunomarcajes dobles.

V. REACTIVOS BÁSICOS.
Anticuerpos:
Introducción. Inmunoglobulinas. Anticuerpos policlonales y monoclonales. Afinidad de anticuerpos. Reacción cruzada. Estabilidad de anticuerpos. Manipulación.
Marcadores: Enzimas: peroxidasa y fosfatasa alcalina. Metales coloidales. Marcadores fluorescentes: isotiocianato de fluoresceína, isotiocianato tetra metil rodamina. Radioisótopos.

VI. TÉCNICA INMUNOHISTOQUÍMICA
Inmunohistoquímica Básica
Concentración de anticuerpos. Dilución. Incubación: tiempos y tipos. Anticuerpos secundarios. Substratos y cromógenos. Sistemas de visualización.
Métodos Inmunohistoquímicos
Técnicas inmunoenzimáticas: 1- Métodos directos: técnica tradicional, técnica EPOS. 2- Métodos Indirectos: técnica tradicional, técnica de anticuerpos no conjugados, técnicas Avidina-Biotina, sándwich de hapteno, técnicas basadas en polímeros.

VII. CONTROLES.
Introducción. Controles positivos y negativos: su importancia, utilización y tipos.

VIII. DIFICULTADES EN EL INMUNOMARCAJE.
Bloqueo de la actividad enzimática endógena de los tejidos: peroxidasa, fosfatasa alcalina. Bloqueo de la actividad de la biotina endógena de los tejidos. Sustratos para peroxidasa y fosfatasa alcalina. Tinción inespecífica de fondo (Background). Supresión del Background. Tinción inadecuada.

Actividades prácticas del curso.

  • Reconocimiento y manejo del instrumental necesario para el desarrollo de las técnicas IHQ.
  • Preparación de buffers de lavado y recuperación.
  • Dilución de Anticuerpos.
  • Desarrollo de la técnica IHQ: utilización de diferentes métodos de desenmascaramiento antigénico, empleo de anticuerpos monoclonales y policlonales. Controles positivos y negativos.
  • Realización de la técnica de inmunomarcaje doble.
  • Lectura e interpretación de resultados. Toma de microfotografías.

Condiciones de aprobación
Porcentaje de Asistencia: Ochenta por ciento (80%) de asistencia a clases teóricas y prácticas.
Evaluación:
En la etapa final del curso, los participantes deberán exponer los resultados obtenidos con la aplicación de las diferentes técnicas de inmunomarcaje empleadas, posteriormente se discutirán grupalmente los resultados presentados teniendo en cuenta: anticuerpo empleado, marcaje obtenido e interpretación de resultados realizada.

Carga horaria total 42 hora:
28 hs presenciales (8 hs teoría-20 hs prácticas) + 14 hs no presenciales.

Cupo máximo: quince (15) asistentes
Cierre de inscripción: 31 de mayo de 2018.

Aranceles
El costo de inscripción al curso completo (módulos teóricos más módulos prácticos) es $ 4.000 (cuatro mil pesos) equivalente a 250 GAVETS INSTITUCIONALES. El mismo incluye la retención del 15 % que realiza la Secretaría de Estudios de Postgrado y Educación Continua de la FCV-UNR, material bibliográfico, reactivos y fungibles para el desarrollo de los prácticos, gastos administrativos y de gestión y de expedición de certificados de asistencia y/o aprobación del curso.
El pago se podrá efectuar hasta en tres (3) cuotas teniendo en cuenta que el monto total deberá ser cancelado antes del inicio del curso. Los interesados también podrán optar por inscribirse separadamente al módulo teórico el cual tendrá un costo de inscripción de $ 1120 (mil ciento veinte pesos o 70 GAVETS INSTITUCIONALES).
Las facturas serán emitidas por la Asociación Cooperadora “Complejo Agropecuario Casilda”.

Modalidad de inscripción
Los interesados podrán preinscribirse en la Secretaría de Estudios de Postgrado y Educación Continua por vía telefónica o correo electrónico manifestando su voluntad de participar.
El cierre de inscripción será el 31 de mayo de 2018.
Los formularios solicitados desde la Secretaría de Ciencia y Tecnología para comité de bioética y CICUAL no aplican para este curso. En cuanto a las medidas de bioseguridad el curso se realizará contemplando todas las medidas de bioseguridad pertinentes.

Inscripción hasta el 24/05/2018:
Secretaría de Estudios de Posgrado y Educación Continua
posgrado-vet@fveter.unr.edu.ar
Tel: 03464-422050 interno 287