Técnicas Inmunohistoquímicas: características generales y aplicaciones

4, 5, 6, 11, 12 y 13 de junio de 2019. 15:00 a 19:00 hs.
Facultad de Ciencias Veterinarias- UNR

Director: Dr. Fabricio Vigliano

Comité organizador:

  • Dra. Andrea Boaglio
  • Méd. Vet. Manuel Campana
  • Dr. Pablo Cerutti
  • Méd. Vet. Mariano Garate
  • Dra. Jorgelina Manes
  • Tec. Sup. Hist. María Belén Mascambroni
  • Lic. Andrea Mendia
  • Méd. Vet. Lautaro Muñoz
  • Méd. Vet.Alejandra Prado
  • Dr. Agustín Rinaudo
  • Sr. Sacha Santía
  • Méd. Vet. Caren Savia
  • Méd. Vet. Marcelo Tobin
  • Dr. Fabricio Vigliano

Disertantes:

  • Dr. Pablo A. Cerutti. Cátedra de Histología II y Embriología Especial, FCV-UNR
  • Téc. Sup. en Histotecnología María Belén Mascambroni. Cátedras de Histología I y Embriología Básica e Histología II y Embriología Especial, FCV-UNR
  • Méd. Vet. Lautaro Muñoz. Cátedra de Histología II y Embriología Especial, FCV-UNR
  • Méd. Vet. Marcelo Tobin. Cátedra de Histología II y Embriología Especial, FCV-UNR
  • Dr. Fabricio A. Vigliano. Profesor Titular dedicación exclusiva. Cátedra de Histología I y Embriología Básica, FCV-UNR

Objetivos

  • Conocer el fundamento de las técnicas inmunohistoquímicas (IHQ) y su aplicación.
  • Adquirir los conocimientos necesarios para la adecuada recolección y procesado de muestras, que permitan la obtención de resultados satisfactorios.
  • Adquirir entrenamiento en el desarrollo completo de las principales técnicas IHQ.
  • Realizar una correcta lectura e interpretación de resultados
  • Adquirir criterios que le permitan seleccionar la técnica IHQ que mejor se adapte a sus requerimientos.

Programa del curso

Contenidos teóricos

  1. Introduccion a las tecnicas inmunohistoquimicas: El objetivo de la histoquímica. La histoquímica en el laboratorio. Enzimo-Histoquímica. Principios. Inmunohistoquímica.
  2. Muestreo y fijación.: Obtención de la muestra: importancia, tipos, tamaño. Bases teóricas de la fijación. Formación de enlaces cruzados. Distintos tipos fijadores. Ventajas y desventajas de cada uno. Congelación. Muestreo y fijación para microscopía electrónica de transmisión (MET).
  3. Procesamiento de muestras: Inclusión en parafina: deshidratación, aclarado, infiltración. Inclusión definitiva y formación del bloque. Realización de cortes histológicos. Secado y almacenamiento. Coloración y montaje. Citologías. Cortes en congelación y MET.
  4. Recuperación antigénica: Fundamentos.
    1. Métodos físicos: tipos, procedimiento, ventajas y desventajas. Tampones de recuperación.
    2. Método enzimático: tipos, procedimiento, ventajas y desventajas. Recuperación antigénica y su uso en los inmunomarcajes dobles.
  5. Reactivos básicos.
    • Anticuerpos: Introducción. Inmunoglobulinas. Anticuerpos policlonales y monoclonales. Afinidad de anticuerpos. Reacción cruzada. Estabilidad de anticuerpos. Manipulación.
    • Marcadores: Enzimas: peroxidasa y fosfatasa alcalina. Metales coloidales. Marcadores fluorescentes: isotiocianato de fluoresceína, isotiocianato tetra metil rodamina. Radioisótopos.
  6. Técnica inmunohistoquímica
    • Inmunohistoquímica Básica: Concentración de anticuerpos. Dilución. Incubación: tiempos y tipos. Anticuerpos secundarios. Substratos y cromógenos. Sistemas de visualización.
    • Métodos Inmunohistoquímicos: Técnicas inmunoenzimáticas:
      1. Métodos directos: técnica tradicional, técnica EPOS.
      2. Métodos Indirectos: técnica tradicional, técnica de anticuerpos no conjugados, técnicas Avidina-Biotina, sándwich de hapteno, técnicas basadas en polímeros.
  7. Controles: Introducción. Controles positivos y negativos: su importancia, utilización y tipos.
  8. Dificultades en el inmunomarcaje: Bloqueo de la actividad enzimática endógena de los tejidos: peroxidasa, fosfatasa alcalina. Bloqueo de la actividad de la biotina endógena de los tejidos. Sustratos para peroxidasa y fosfatasa alcalina. Tinción inespecífica de fondo (Background). Supresión del Background. Tinción inadecuada.

Contenidos prácticos

  • Reconocimiento y manejo del instrumental necesario para el desarrollo de las técnicas IHQ.
  • Preparación de buffers de lavado y recuperación.
  • Dilución de Anticuerpos.
  • Desarrollo de la técnica IHQ: utilización de diferentes métodos de desenmascaramiento antigénico, empleo de anticuerpos monoclonales y policlonales. Controles positivos y negativos.
  • Realización de la técnica de inmunomarcaje doble.
  • Lectura e interpretación de resultados. Toma de microfotografías.

Cronograma del curso

  • Martes 4 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Teoría (Unidades I a IV)
  • Miércoles 5 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Teoría (Unidades V y VI) / Prácticas
  • Jueves 6 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Teoría (Unidades VII y VIII) / Prácticas
  • Martes 11 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Prácticas
  • Miércoles 12 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Prácticas
  • Jueves 6 de junio. 15:00 a 19:00 hs.: Resultados/obtención de imágenes. Discusión casos

Bibliografía

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  • Rodrigo, J., Pedrosa, J.A., Peinado, M.A., Esteban, F.J., Fernández, A.P., Bentura, M.L., Martínez de Velasco, J. & Martínez-Murillo, R. 1996. Fijadores más usuales empleados en inmunocitoquímica. En: Avances en inmunocitoquímica y técnicas relacionadas. Peinado, M.A., Pedrosa, J.A. & Rodrigo, J. Eds. Jaén, Universidad. 61-79.
  • Rodrigo, J., Thompson, R.P., Peinado, M.A., Esteban, F.J., Fernández, A.P., Sánchez, E., Pedrosa, J.A., Bentura, M.L. & Martínez-Murillo, R. 1996. Preparación de los tejidos y sistema de corte. En: Avances en inmunocitoquímica y técnicas relacionadas. Peinado, M.A., Pedrosa, J.A. & Rodrigo, J. Eds. Jaén, Universidad. 81-106.
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Periodicidad: Anual

Carga horaria: 42 horas (28 hs presenciales: 8 hs. teoría+20 hs. prácticas); 14 hs. no presenciales

Cupo Máximo: 15 asistentes

Aranceles:

  • Curso completo (Módulos teóricos y módulos prácticos): $ 6.000 (273 GAVETs)
  • Módulos teóricos: $ 1680 (76 GAVETs)

Asistencia: 80% a clases teóricas y prácticas.

Condiciones de aprobación: En la etapa final del curso, los participantes deberán exponer los resultados obtenidos con la aplicación de las diferentes técnicas de inmunomarcaje empleadas, posteriormente se discutirán grupalmente los resultados presentados teniendo en cuenta: anticuerpo empleado, marcaje obtenido e interpretación de resultados realizada.

Población objetivo: Graduados universitarios de instituciones públicas o privadas, nacionales o extranjeras, que posean título de carreras afines a las Ciencias Biológicas y Técnicos Histotecnólogos.

Inscripción: Hasta el 31/05/19
Secretaria de Estudios de Posgrado y Educación Continua
posgrado-vet@fveter.unr.edu.ar
Tel: 03464-422050. Interno 287

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